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氨基糖是一種將糖結構上的羥基取代為氨基而形成的一種有機化合物,這個取代的過程需要有專屬的合成酶完成。氨基糖它是細胞壁肽聚糖或幾丁質(zhì)的關鍵組成部分,同時也為蛋白質(zhì)修飾提供了原料。在細胞的代謝過程中,必須要攝取細胞外的氨基糖。氨基糖為細胞提供營養(yǎng),為蛋白質(zhì)提供修飾原料,為細胞提供骨架支撐,是蛋白質(zhì)N-糖基化、O-糖基化及GPI糖脂合成過程中不可缺少的一個部分。土壤中的氨基糖,標志著微生物的殘留情況。因為氨基糖是細胞壁肽聚糖和幾丁質(zhì)的基本組成單位,廣泛存在于土壤真菌、細菌以及土壤低等動物中。而土壤氨基糖并不是單一的,它包括了葡糖胺、胞壁酸、半乳糖胺和甘露糖胺。
檢測土壤中氨基糖含量的方法有:高效液相色譜(HPLC)法、酶解法、比色法等。
1. 高效液相色譜法(HPLC)
測定土壤中氨基糖的含量,HPLC是常用的一種方法。利用色譜儀將土壤樣品中的氨基糖分離出來,并通過檢測器獲取峰值信號。在檢測之初,要對樣品進行預處理才能上機檢測。而要檢測出準確的含量,就要通過梯度稀釋的標準品,在HPLC上讀取數(shù)據(jù)和圖譜,以此來制作標準曲線,計算回歸方程。以檢測標準品的條件為條件,同樣方式來檢測樣品,通過讀取的數(shù)據(jù)結合標準曲線,計算出樣品中所包含的氨基糖的含量。這種方法分離效果好、靈敏度高、結果準確。但需要對設備足夠熟悉,了解檢測方法和過程,并能科學判斷獲得的數(shù)據(jù)。也有用到氣相或氣質(zhì)聯(lián)用的方法,檢測土壤中氨基糖的含量。
2. 酶解法
酶解法就是通過酶解劑,將土壤中的氨基糖轉化為可測定的產(chǎn)物。酶解可以在常溫下進行,也可以在特定的溫度條件下完成,當酶解完成的時候就要有特定的標記物來確定終點。通過酶解的程度來判斷樣品中含有氨基糖的量。常用的酶解劑有酶解酶和葡萄糖氧化酶,反應的過程中要注意酶解的條件,避免不穩(wěn)定因素對酶解效果有影響??梢酝ㄟ^特定的標記物,來確定酶反應的情況,最后用熒光或比色的方法來確定氨基糖的含量。此外,還可以用酸水解的方法,通過鹽酸或硫酸對樣品進行水解,用適當?shù)闹甘緞┻M行滴定,可以計算出樣品中氨基糖的含量。
3. 比色法
比色法就是通過氨基糖和特定試劑反應,發(fā)生顏色的變化。顏色的變化,通過標準品的測定,用分光光度計測定顏色的吸光度值,從而對應已知的濃度值。檢測土壤氨基糖含量,主要有這么幾個步驟。準備土壤樣品,將土壤樣品干燥餅過篩,去除掉雜質(zhì)或大的顆粒。然后,加入適量的緩沖液,混勻離心,得到上清液。更為重要的是,制作標準曲線,這里就不用詳細說了。測定土壤樣品,要進行顯色反應,要滿足反應的條件,并在規(guī)定的時間內(nèi)完成,在540nm的波長處讀取數(shù)據(jù),結合標準曲線來計算出樣品中的氨基糖含量。