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兒茶素是一種多酚類化合物,具體來(lái)說(shuō)是黃烷-3-醇類。它廣泛的存在天然植物中,如綠茶,水果和蔬菜中。兒茶素的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基(-OH),具有較強(qiáng)的抗氧化能力?;瘜W(xué)式為C15H14O6,相對(duì)分子質(zhì)量為290.28,溶于熱水、乙醇、冰醋酸、丙酮,微溶于冷水和乙醚,幾乎不溶于苯、氯仿及石油醚。從醫(yī)學(xué)領(lǐng)域來(lái)說(shuō),兒茶素具有抗氧化,抗炎,調(diào)節(jié)代謝,清除自由基,抑制炎癥因子(如IL-6,TNF-α等),改善血糖和血脂水平,保護(hù)心血管等作用。
兒茶素類化合物主要包括8種單體:兒茶素,表兒茶素,沒(méi)食子兒茶素,表沒(méi)食子兒茶素,兒茶素沒(méi)食子酸酯,表兒茶素沒(méi)食子酸酯,沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯,表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯。
檢測(cè)方法,有紫外-可見分光光度法,高效液相色譜(HPLC),液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)等。以HPLC為例,簡(jiǎn)單的介紹一下流程。
1.樣品處理
可以參考相關(guān)的推薦標(biāo)準(zhǔn),比如將0.2g的樣本磨碎,加入10ml的離心管中,加入70%的甲醇溶液攪拌均勻,放在70℃水浴浸提10min,冷卻到室溫。3500r/min離心10min將上清液轉(zhuǎn)移到10ml的容量瓶,殘?jiān)?ml的70%甲醇提取一次,定容10ml,用0.45um膜過(guò)濾,待測(cè)。
2.色譜方法
C18色譜柱,250mm長(zhǎng),4.6mm內(nèi)徑,5um粒徑;柱溫35℃。流動(dòng)相A為90ml乙腈,20ml乙酸,2mlEDTA,1000ml定容0.45um膜過(guò)濾;流動(dòng)相B為800ml乙腈,20ml乙酸,2mlEDTA,1000ml定容0.45um膜過(guò)濾,梯度洗脫。流速1ml/min,紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)278nm,進(jìn)樣量10ul。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
如果要測(cè)8個(gè)單體的含量,需要用這8種化合物的標(biāo)準(zhǔn)品。梯度稀釋6個(gè)濃度點(diǎn),確定最低點(diǎn)在檢測(cè)限范圍內(nèi),以上述的色譜條件進(jìn)樣到HPLC中測(cè)定色譜峰。對(duì)各個(gè)色譜峰的位置進(jìn)行記錄色譜峰的面積進(jìn)行積分處理。對(duì)應(yīng)各個(gè)化合物的不同濃度點(diǎn),可以繪制出對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程,相關(guān)系數(shù)r2需大于0.999。
4.含量計(jì)算
樣品的進(jìn)樣和處理方式和標(biāo)準(zhǔn)品相似的,需要知道出峰的位置,從而識(shí)別出目標(biāo)化合物,并對(duì)它的面積進(jìn)行積分處理,根據(jù)回歸方程計(jì)算出樣品中的兒茶素單體含量。