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松果菊苷是從管花肉蓯蓉或松果菊中提取出來的一種天然的苯乙醇苷類化合物,具有抗氧化,抗炎,抗疲勞,調節(jié)免疫,保護神經等作用,目前停留在研究階段,比如抑制NF-κB等炎癥通路,降低促炎因子(如TNF-α、IL-6)釋放。從結構上來看,是它有苯乙醇苷元和糖基結合而成的,是水溶性的酚類化合物。化學式為C35H46O20,分子量為786.73,易溶于甲醇、乙醇等有機溶劑。
測定松果菊苷的含量,一般實驗室采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質譜聯(lián)用(LC-MS)法。
1.樣本制備
將樣本進行粉碎研磨,過四號篩,精密稱取1g,放入100ml的棕色容量瓶中,加入50%的甲醇50ml,塞住塞子,搖晃均勻,浸泡30min,超聲處理40min,放冷后用50%甲醇補足丟失的重量,搖勻后靜置,過濾,待測。
2.色譜方法
C18色譜柱,250mm長,4.6mm內徑,5um粒徑;柱溫30℃。以乙腈和0.4%磷酸為流動相梯度洗脫,或以甲醇和0.1%甲酸為流動相梯度洗脫,流速1mL/min。紫外檢測器,波長330nm,進樣量10uL。
3.標準曲線
精密稱取適量的松果菊苷的標準品,加入50%甲醇溶液,制成0.2mg/mL的標準溶液,梯度稀釋6個濃度點,在檢測限的有效范圍內。進樣到HPLC,以上述的色譜方法,測出各個濃度的色譜圖,記錄色譜峰的保留時間和面積。對色譜峰的面積進行積分,結合對應點的標準溶液濃度,繪制出標準曲線,得到回歸方程,相關系數(shù)r2需要大于0.999。
4含量計算
樣品的測定過程和標準品是相似的,在實際操作的過程中可能因為雜質或色譜柱出現(xiàn)堵塞,破損等問題而導致出峰不規(guī)則,需要參考相關的經驗進行調整。根據色譜峰的保留時間,識別出樣本溶液對應的松果菊苷的色譜峰。對色譜峰進行積分,代入到標準曲線,可以計算出松果菊苷的含量。